伊文思藍(lán)染色液

tunel細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)會用到伊文思藍(lán)染色液（ Evans blue漢稱偶氮藍(lán)，分子式C34H24NNa4O14S4，分子量為96080

CAS號為314-13-6伊文思藍(lán)與臺盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。

操作步驟:
（一）血腦屏障通透性

1、取處理后的實(shí)驗(yàn)動物（以小鼠為例，靜脈注射 Evans blue stain（0.5%小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5~1h后處死小鼠

2、腦組織腦組織置于15m離心管中，加入1 m pbs，迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿

3、取上清，加入等量三lu乙酸，4℃孵育。3、取上清，按上清：丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育24h 4、離心15min5、取上述溶液，用分光光度計(jì)測620nm處吸光值OD值）。同時(shí)測定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的○D值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測待測樣品的依文思藍(lán)含

（二）活細(xì)胞染色

1、取100μ重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi)，入10oμ Evans blue stair輕輕混勻染色染色時(shí)間可適當(dāng)延長，但不宜超過10min）
2、吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù)500個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。

細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下細(xì)胞存活率=（細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù)）/細(xì)胞總數(shù)x100%

此產(chǎn)品只用于科研，不作用于人體